在細胞生物學、肝臟疾病機製研究等範圍,高品質的小鼠肝臟單細胞懸液是開展後續流式分析、單細胞測序、細胞性能實驗的核心前提。傳統手動製備方法常面臨諸多難題:消化酶作用不均導致細胞解離不徹底,反復操作中細胞活性易受溫度影響下降,且人工研磨、過濾步驟繁琐,難以保證批次間的一致性。這些問題不僅拖慢實驗進度,還可能因樣本品質不穩定影響後續檢測數據的可靠性。而上海凈信單細胞懸液製備儀憑借標準化程序控製、精準溫控及自動化操作,為小鼠肝臟單細胞懸液製備供應了穩定高效的解決方案,有效規避傳統方法的痛點。
實驗目的:小鼠肝臟製備成單細胞懸液,為後續流式細胞分析、單細胞測序、細胞性能檢測等實驗供應高活性、高純度的單細胞樣本,保障實驗數據的準確性與重復性。
實驗選用儀器:
單細胞懸液製備儀 JX-CKSM-4WK-B
實驗步驟:
1、連接儀器電源,打開開關,選好肝臟程序以備用。
2、消化酶和終止液提前用流動自來水解凍,讓其混合更加均勻。
3、小鼠斷頸處死後,取出肝臟部,放入有PBS的培養皿中,放在冰上。
將選取的肝臟組織用PBS洗滌後,用眼科剪剪碎、放入2ml消化管中,加入1ml左右消化酶。
5、放到模塊上,選擇對應程序,點擊運行開始。
6、時間結束後儀器自動停止。
7、用70um濾網過濾,加入終止液終止消化(消化液:終止液=1:1)
過濾後的懸液放到離心機上重懸、重懸後棄掉上清,加入2ml裂紅溶液(200ulFBS),冰上裂紅(3-5分鐘),然後加入500ulPBS+1ml碎片去除劑,離心後棄上清,然後洗細胞兩次。
最後加入少量無菌PBS打散混勻底部沈澱細胞,即可得到單細胞懸液。
9、OAPI進行染色,細胞計數儀看結果。
細胞計數儀結果圖
註意事項:
1、單細胞試劑盒要在-20℃低溫保存,使用時提前拿出來用涼水解凍,切記用溫熱水。
2、註意不要清洗單細胞懸液次數或時間太長,導致細胞損失。
3、上海凈信單細胞懸液製備儀讓肝臟樣本處理更省心
從本次小鼠肝臟單細胞懸液製備實驗來看,上海凈信單細胞懸液製備儀的優勢尤為突出。相比傳統手動操作,儀器預設的肝臟專屬程序省去了反復調試參數的麻煩,操作人員只需按步驟放置樣本、啟動程序,即可達成消化酶的精準作用 —— 避免了人工控製消化時間、溫度導致的解離過度或不徹底問題。實驗中,從組織剪碎到儀器自動停止消化僅需常規步驟時長,且全程無需頻繁轉移樣本,最大程度減少了細胞在室溫下暴露的時間,為後續裂紅、清洗步驟保留了另外活細胞。
後續細胞計數儀結果也印證了儀器的可靠性:製備的單細胞懸液活率穩定,細胞分散均勻,無明顯組織碎片殘留,完全滿足 OAPI 染色及後續實驗的要求。尤其值得一提的是,儀器操作門槛低,即使是剛接觸樣本製備的實驗人員,按照流程也能快速上手,有效降低了因操作經驗差異導致的實驗誤差。
對於需要頻繁開展小鼠肝臟相關研究的實驗室來說,上海凈信單細胞懸液製備儀不僅是提升實驗效率的 “好幫手”,更是保障樣本品質穩定性的 “定心丸”。它解決了傳統方法中 “耗時、費力、結果不穩定” 的核心痛點,讓科研人員能將另外精力投入到後續的數據分析與機製探索中,為肝臟範圍的研究供應了堅實的樣本製備幫助。